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96孔PCR板在PCR擴(kuò)增過程中需注意哪些事項?
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是一項廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代生物學(xué)研究中的技術(shù),可以在短時間內(nèi)擴(kuò)增特定DNA序列。96孔PCR板是其中重要的實驗器材之一,下面BUNSEN本生將介紹在其使用過程中需要注意的事項。
1、預(yù)處理
在進(jìn)行PCR前,首先需要對96孔PCR板進(jìn)行預(yù)處理。因為新制備出來的光滑塑料表面通常不容易與試劑液接觸并形成表面張力導(dǎo)致反應(yīng)效率低下。因此,在使用前我們需要經(jīng)過去臟、消毒和干燥等步驟。
2、填充
填充樣本時,保持操作臺整潔嚴(yán)肅;避免交叉污染;同時也需留意分配均勻樣品量準(zhǔn)確無誤以及所選取植物組織是否具有代表性。
3、加蓋
加蓋后需輕輕壓平所有井至水平狀態(tài),并檢查各井間距是否相等,看上去像個正方形或者長方形而不是歪歪扭扭.
4、溫度控制
PCR過程中溫度較高,超出了許多試劑/化合物和工具質(zhì)量可承擔(dān)的高溫范圍。因此,在實驗過程中,必須要嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度,并進(jìn)行恰當(dāng)?shù)睦鋮s。
5、反應(yīng)液體積
在加入反應(yīng)液時,不要超出PCR板孔口的限制。另外還需注意各孔內(nèi)反應(yīng)液量是否均勻,避免空氣泡等情況影響擴(kuò)增效果。
6、重復(fù)利用問題
為了更好地節(jié)約資源并保障環(huán)境安全,實驗室能否將96孔PCR板回收再利用?盡管這聽起來是一種可行性較高且環(huán)保的選擇,但是需要確保清晰化學(xué)物質(zhì)殘留和消毒處理后再次使用;同時也需確保沒有任何污染或誤差會對下一輪實驗產(chǎn)生干擾影響.
總之,在使用96孔PCR板時,我們必須非常仔細(xì)地操作每一個步驟以及精準(zhǔn)完成每個試劑藥品投料分配比例、時間點(diǎn)所任務(wù);這樣可以幫助我們避免很多潛在風(fēng)險和錯誤從而提供結(jié)果!
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